Приложение 3
3. Цвят реакции към протеини
Цвят реакции са използвани за определяне на протеин природни вещества, идентификация протеин и определяне на техния състав аминокиселина в различни биологични течности. В клиничната лабораторна практика, тези методи се използват за определяне на количеството на протеин в кръвната плазма аминокиселини в урина и кръв, за откриване на наследствени и придобити метаболизъм при новородени патологии.
Биуретът реакция на пептидната връзка.
Тя се основава на способността на пептидни връзки (-CO-NH-) за образуване на меден сулфат в алкална среда оцветени комплексни съединения, интензивността на цвета на който зависи от дължината на полипептидната верига. Разтворът на протеин дава цвят синьо-виолетово.
1) белтък, 1% разтвор (пилешки яйчен протеин филтрува през марля и се разрежда с дестилирана вода 1:10);
2) NaOH, 10% разтвор;
3) Cu (OH) 2, 1% разтвор.
Курсът на определянето. При извършването на тръбата 5 капки разтвор яйчен протеин, 3 капки NaOH, 1 Cu (OH) 2 се разбърква капка. Съдържанието на епруветката се превръща цвят синьо-виолетов.
Реакционната РЕЗЮМЕ е образуването на съединение оцветени в синьо и лилаво, и нинхидрин, състояща се от амино киселинна хидролиза продукти. Тази реакция е характеристика на амино-позиция в настоящето в естествените аминокиселини и протеини.
1) белтък, 1% разтвор;
2) нинхидрин 0.5% воден разтвор на
Курсът на определянето. При извършването на тръбата 5 капки яйчен протеин разтвор, и след това 5 капки нинхидрин, сместа се загрява до кипене. Оказва се, розово-лилав цвят, който минава време в синьо-виолетово.
Когато се добави към разтвора на протеин, концентрирана азотна киселина и нагряване на жълтото оцветяване показва, преминаваща в присъствието на алкален в оранжево. Реакционната РЕЗЮМЕ състои в нитриране на бензенов пръстен циклична амино азотна киселина за образуване на нитросъединения да се утаи. Реакцията разкрива присъствието на циклични аминокиселини в протеина.
1) белтък, 1% разтвор;
2) концентрирана азотна киселина;
3) NaOH, 10% разтвор.
Курсът на определянето. Към 5 капки яйчен белтък разтвор се прибавят 3 капки азотна киселина (внимание!) Се нагрява. Оказва се жълта утайка. След охлаждане (за предпочитане в утайката) 10 капки NaOH, с оранжев цвят.
Триптофан амино киселина в кисела среда, взаимодейства с киселина алдехиди, кондензационни продукти образува цвят на червено-виолетов.
1) неразреден яйчен протеин
2) се концентрира (ледена) оцетна киселина;
3) концентрирана сярна киселина.
Курсът на определянето. За един протеин на капки се добавят 10 капки оцетна киселина. Наклон стената на тръбата са внимателно се прибавя на капки 0,5 мл сярна киселина, така че течността не се смесват. При престояване тръбите в течна ръб изглежда червеникаво-лилаво пръстен.
Аминокиселините, съдържащи сулфхидрилни - SH, подложен на алкална хидролиза с натриев сулфид Na 2 С. Последният, взаимодейства с натриев plumbite (образуван по време на реакцията между оловен ацетат и NaOH), образува утайка от оловен сулфид PbS черен или кафяв.
1) белтък, 1% разтвор;
2) реагент (5% разтвор Foll на оловен ацетат се прибавя равен обем от 30% разтвор на NaOH за да се разтвори образуваната утайка).
Курсът на определянето. Към 5 протеинов разтвор на капки се добавят 5 капки реагент Foll и се загрява 2-3 минути. След като престои 1-2 минути. Това изглежда черен или кафява утайка.