Хистологичните изследователски методи

Хистологичните изследвания методи, използвани за проучване на структурата и функцията на клетки и тъкани, животински и растителни организми в норма, патология и експеримент. В основата на хистологични методи на изследване е хистологично техника - набор от инструкции техники, използвани при производството на продукти от клетки и тъкани за тяхното микроскопско изследване. Микроскопско изследване на клетки и тъкани може да се извърши по два основни начина, в зависимост от състоянието на обекта на изследване: изследване на живи клетки и тъкани, изследването на не-живите клетки и тъкани, като се запазва структурата благодарение на специални методи на фиксиране.

Проучването на живи същества - от жизненоважно значение (supravital) - дава възможност да се наблюдават физиологични процеси в клетките и тъканите, живота си сграда. Тя се провежда върху клетки, свободно суспендирани в течна среда (кръвни клетки, епителни клетки и остъргвания др.), Както и клетъчни и тъканни култури, отглеждани на специален растежна среда. Предметът ин виво наблюдения може да бъде тънък, прозрачен филм тъкан (мезентериална тъкан, palama). В експериментални изследвания, методът на биологични прозорци (прозрачни камери имплантация) и изследване на тъканни импланти на природен прозрачен среда, например в предната камера на очите на животни. В зависимост от задачата на жизнените процеси използват различни специални методи на микроскопия: тъмно поле, фазов контраст, флуоресценция, поляризация, ултравиолетово. Vital хистологични методи се използват главно за биологични и биомедицински изследвания. Широкото им използване е ограничено до големи технически трудности, свързани със свойствата на тъканите изпитват. В медицинските изследвания, особено в практиката на следкланичен методи лаборатория за научни изследвания, използвани неподвижни обекти.

Целта на определяне интравитална запази структура тъкан клетка и чрез бързо излагане на химични агенти, които възпрепятстват развитието на промени постмортални. Изборът на метод за определяне зависи от целите на изследването и фиксиращи елементи на материала. По този начин, за откриване на фините клетъчни структури, използвани за закрепване смеси, съдържащи соли на тежки метали (например, sulemu) за цитологичен фиксатор-добрата сервира целите на осмиев тетраоксид и често се използва електронна микроскопия. Универсален фиксатор е формалдехид се използва под формата на 10% разтвор на формалин. За да решите е еднакъв и пълни парченца тъкан трябва да се съхраняват малки, и сумата на търговец на наркотици течност - да надвишава сумата, определена от материалните много пъти. Чрез определяне на крайните части обикновено се промиват във вода или алкохол. Твърдите компоненти тъкан (например, утаяване на калциеви соли) се отстраняват чрез методи декалцификация.

Най-бързият и най-лесният начин да се подготвите раздел тъкан обикновено се използва, когато се бърза диагностика замразяване и получаване на част от тъканните участъци на замръзване микротом. Въпреки това е трудно да се получи достатъчно тънки участъци и участъци с малки обекти и разлагаща тъкан. Следователно, парчета тъкан, обикновено излива в запечатване среда - парафин или целоидин. Фиксирана тъкан е дехидратиран в алкохоли с увеличаване крепост извършват чрез междинен разтворител (ксилен или толуен, парафин, алкохол-етер, за да целоидин) и импрегнирани с парафин или целоидин. Напълнете в парафин позволява да се получи по-тънки резенчета (5-8 до 1-2 мм) в сравнение с целоидин за пълнене. Срезите са подготвени за микроскопско изследване с шейни или ротационни микротоми. Ултратънки секции (дебелина 90-100 на 5-15 пМ), необходими за електрон микроскопски изследвания на ultratome подготвени. Ultratome използвате в светлинна микроскопия за semithin секции. Получените секции се оцветяват за ясно разграничаване на клетки и тъканни структури, които са различни възприемат цветове. Основни багрила - оцветяващи основи и техните соли (метилен синьо, толуидиново синьо, лазурни, хематоксилин, Бисмарк Brown) - оцветените т.нар базофилни структури (ядро на inoglia клетки). Кисели багрила - кисели багрила и техните соли (пикринова киселина, еозин, еритрозин) - оцветени ацидофилни или oxyphilous, структура (цитоплазмата на клетки, колаген, еластични влакна). От живописта да бъдат разграничени импрегниране - специален метод се основава на способността на определени участъци от клетки и тъкани, за да се възстанови тежки метали (като сребро, злато, осмий) от техните соли и по този начин придобива интензивен цвят.

Подготовка на хистологичен препарат завършва сключването му в околната среда, за да се гарантира безопасността на конструкцията на обекта, неговото цвета и прозрачността. Най-често използвани за тази цел органични смоли като Канада балсам.