тема 2
Има следните видове микроскопия:
1) светлинна микроскопия (най-често срещаният тип на микроскопия, резолюцията на микроскопа е 0.2 m);
2) UV микроскопия (резолюция на микроскопа е 0.1 m);
3) флуоресцентна микроскопия (използван в теста за определяне на хистологичен получаването на някои химически структури);
4) фазово контрастна микроскопия (използван за откриване и изследване на определени структури в проби неоцветени тъкан);
5) поляризиращ микроскоп (използван главно за изучаване структури влакна);
6) тъмно поле микроскопия се използва за изследване на живи същества;
7) микроскопия при падаща светлина (предназначена за изследване на дебели обекти);
8) Електронна микроскопия (най-модерната микроскоп поглед с разделителна способност от 0.1 - 0.7 пМ). Има два вида на електронна микроскопия - прозрачна (за пренос) и сканиране (или хоросан) микроскопия, което дава дисплей повърхностни подструктури на.
Хистологични и цитохимични методи са използвани за определяне на състава на химични вещества и техните количества в някои структури. Принципът на метода се състои в химическата реакция между реагента и субстрата, съдържащ се в изпитваното вещество. В тази реакционна странични продукти, образувани могат да бъдат открити с помощта на светлина или флуоресцентна микроскопия.
interferonometrii метод позволява да се определи масата на сухото вещество в хола или неподвижни обекти.
метод клетъчна култура - нараства клетките в епруветки или в специални капсули в тялото и последващо изследване на живите клетки под микроскоп.
Vital метод оцветяване - въвеждане на животни в кръвта или в коремната багрило кухина (trepanovogo синьо), които, когато живота на животното се улавя от някои клетки - макрофаги, но след клането на животното и получаване на лекарството се определя и се преброяват клетки, съдържащи оцветител.
Immunomorfologichesky методи позволяват използване на предварително имунни реакции, извършвани (въз основа на взаимодействието на антиген - антитела) за определяне на субпопулация на лимфоцити, степен на чуждестранен клетки проведе хистологично типизиране на тъкани и органи, т.е., да се определи тяхната хистосъвместимост допълнително трансплантация ...
диференциален метод центрофугиране - изследване на отделните органели или техни фрагменти, изолирани от клетките. За тази цел, на изпитваната проба се стрива тяло, изсипва се нормален физиологичен разтвор и след това се диспергира в центрофуга с различна скорост (от 2-150000. 1 мин). В резултат на центрофугиране интересни фракции след това се изследват чрез различни методи.
методи морфометрични - количествени методи. Те ви позволяват да се определи размера и обема на ядрото - kariometriya, клетка - цитометрия органели - електронен морфометрията, както и за определяне на броя на различните клетъчни популации и субпопулации. Тези методи се използват широко в научни изследвания.
Различни експериментални методи - храна и вода натоварване, физически методи (UHF, микровълнова печка, лазери, магнити). Те се използват за изучаване на взаимодействието на структурата на лихви по някакъв ефект, и в съчетание с методите на морфометрия, cyto- и хистохимия. Тези методи се използват и в научните изследвания.
По този начин, основните и най-често срещаният метод е изучаването на хистологията в микроскопия. Получаване на хистологичен препарат включва следните стъпки.
- парче тъкан или орган. Когато ограда материал е необходимо да се спазват следните правила:
1) ограда материал трябва да се извърши възможно най-рано след смъртта или клането на животното, ако е възможно, от дневната обект как най-добре да се запази структурата на клетки могат да бъдат изследвани;
2) ограда материал трябва да се извършва с остър инструмент, така че да не травматизирам тъкан;
3) Дебелина на парчета не трябва да превишава 5 mm, към разтвора на фиксиране може да проникне през цялата дълбочина на тъканта;
4), трябва да бъдат сигурни, да се направи маркировка парче, посоченото име на тялото на броя на животните или върху името на лицето, датата на вземане на проби.
Тази стъпка се извършва, за да спре метаболитните процеси в клетката и да го предпази от разграждане. За това, за да поеме проучване парче тъкан се потапя в фиксиращ разтвор. Разтворът може да бъде прост (алкохол или формалин) и комплекс (разтвор Carnoy на Tsinker фиксатор). В държача предизвиква денатурация на протеините и запазва клетъчна структура в състоянието, в близост до живот. Фиксирането може да се извърши също чрез замразяване - охлаждане с течен азот или въглероден двуокис поток.
Пълнене парчета плат в уплътняващия среда
(Парафин смола) - или замръзване. Тази стъпка е необходима, за да се впоследствие от тъканта може да се произведе тънък сечение.
Получаване на срезове на микротом или ultramicrotome помощта на специални ножове
Секциите за светлинна микроскопия са залепени върху стъклени плочки, както и за д - монтирани на специална мрежа.
Оцветяване на резени или потъмняване
(За електронна микроскопия). Преди боядисване на парче, което искате да премахнете запечатване среда - извършване deparafirovanie. Използване на цветови контраст на структурите се постига. Багрилата могат да бъдат разделени на основния, киселинни и неутрални. основни багрила (хематоксилин) и кисел (еозин) е най-широко използвани. Често използвани и багрила.
Просвещението секции в ксилол и толуол
Те са затворени в смола (балсам и полистирен) и покривно стъкло.
След тези процедури, лекарството може да се изследва под микроскоп. Поставени под стъклени секции за светлинна микроскопия на дълго може да се съхранява и използва повторно. Всяка от секциите за електронна микроскопия се използва само един път, докато е снимана и изследването в структурата на тъканите, произведени от електрони дифракция.
Ако тъканта има течност последователност (например, кръв, костен мозък), след това лекарството се формулира като намазка върху предметно стъкло, което след това също така фиксиран, оцветени и изследвани.
От нечупливи паренхимните органи, направени под формата на препарати на органи разпечатка извършва фрактура на орган, а след това се прилага на мястото на пързалка вина, на която клетките се придържат наличност. След това лекарството се записва и се изследва.
Някои органи (например, мезентериална pial) или на насипни продукти съединителната тъкан са направени от разтягане на фолиото или ги притиска между две стъклени плочи, последвано от определяне и леене в смолата.